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    HPLC壓力問題及排查方法

    以下為正文:

     

    HPLC壓力問題主要為三大類:壓力偏高、壓力偏低、壓力忽高忽低。以下將詳細講解如何逐段排查問題并解決問題的方法。

     

    一、壓力偏高
    Q1:堵(主要問題)
    排查辦法:逐段排查,確定哪個部件堵。按以下步驟排查
    Step1:換下色譜柱接兩通走純水看壓力情況,以0.5ml/min接兩通壓力走純水觀察壓力。
    若壓力低于30bar(此數值為安捷倫低壓泵前混合方式的四元泵),則為色譜柱堵。
    若壓力高于30bar(此數值為安捷倫低壓泵前混合方式的四元泵),則色譜柱沒有堵住,需再次逐排查,進行step2;
    Step2:擰下兩通接檢測器的那一端柱接頭,觀察壓力變化情況。
    若壓力迅速下降(下降值一般高于20bar),則為流通池堵、連接色譜柱與流通池之間的管線堵、廢液管堵,進行step3。
    若壓力幾乎沒有變化,說明阻尼器之后部分存在堵塞的問題主要為:泵堵、色譜柱前端連接管線堵跳過step3進行step4;
    step3:斷開流通池,觀察壓力變化情況。
    若壓力幾乎無變化,則為連接管線堵。更換連接管線或者高流速反沖管線即可。
    若壓力迅速下降,則為流通池或者廢液管堵。斷開廢液管若壓力迅速下降,則為廢液管堵,此時更換廢液管即可。若斷開廢液管,壓力幾乎無變化,則流通池堵。需對流通池進行沖洗,沖洗方式為:在線沖洗水-1N硝酸-水、熱水反沖(效果最佳)、拆開流通池用乙醇清洗相關部件。
    step4:泵堵造成壓力偏高的一般為阻尼器之后部分存在堵塞的問題。排查方向以下:
    打開排空閥觀察壓力,若壓力偏高(常規四元泵高于10bar)則濾芯堵,反之則反;
    拔掉連接泵與六通閥之間的管線,排查連接管線和六通閥是否堵塞。管線堵更換或高流速沖洗即可。六通閥堵清洗六通閥的方法為:在INJECT位置,把針孔清洗器(Needle Port Cleaner)套在1ml注射器上,注射器事先吸取1mL流動相,慢推即可清洗六通閥,隨后推一針空氣,把孔道里面的液體吹盡。
    將進樣器設置到旁路,觀察壓力變化。若壓力迅速下架則進樣針或針座被堵塞,進樣器轉子上的凹槽被堵塞。拆下針座,超聲清洗即可。
    Q2:壓力傳感器問題
    排查方法:可以在無負載的情況下,用萬用表測量傳感器零點輸出的信號與購買時廠家提供的零點的輸出參數是否對應,如果對應,那么可以再適當的加個壓力,看看是否成線性比。如果不對應或者不成線性比,那么毫無疑問是傳感器壞了。
    Q3:流動相粘度大

    排查方法:更換熟悉的流動相體系,觀察壓力情況即可。

    二、壓力偏低
    Q1:
    排查辦法:逐段檢漏,確定哪個部件漏液。
    Q2:色譜柱失效,固定相已被沖散,導致色譜柱背壓降低
    判斷指標:峰分離度和理論塔板數會明顯降低。
    Q3:若未發現漏液、色譜柱異常情況,則主要為阻尼器之前部分存在堵塞進行以下排查:
    Step1:泵未輸送流動相,需檢查管路是否有氣泡。
    Step2:拔掉流動相過濾頭觀察壓力,若壓力無變化則流動相過濾頭未堵,反之則反。流動相過濾頭堵,更換或者清洗流動相過濾頭。玻璃濾頭用35%硝酸清洗(水煮效果更佳),切記不可對其進行超聲清洗,超聲清洗會將濾頭內部濾孔超碎,濾頭將失去過濾作用。不銹鋼濾頭放入純水或異丙醇中超聲清洗,不可對其用硝酸浸泡(酸液會將金屬腐蝕)。
    Step3:斷開出口閥觀察壓力壓力變化,若壓力還是偏低,則出口閥可能堵,拆開出口閥取相關零件用10%異丙醇超聲清洗(出口閥零件都較小,拆時要小心)。

    Step4:入口閥閥芯有可能堵,更換或清洗入口閥閥芯,清洗按下步驟拆開入口閥取出閥芯用10%異丙醇超聲清洗出口閥芯,超聲時用鑷子拿住超聲,超聲時間不宜過長(一般3分鐘左右即可)避免閥芯內部結構超聲損壞。

     

    三、壓力忽高忽低
    Q1:有氣泡   
    解決辦法:流動相超聲脫氣加在線脫氣、排空(3mL/min的流速)、制造大氣泡排除小氣泡、用異丙醇沖洗管路(異丙醇沖洗管路流速一定要慢)。若管路內有氣泡,建議異丙醇低流速沖洗整個系統(0.2mL/min的流速)。
    Q2:泵的密封墊老化
    解決辦法:更換密封圈(正相系統要使用聚乙烯材質密封圈,若使用反相材質密封圈容易被腐蝕)。
    Q3:出口單向閥故障
    判斷指標:高壓保持一陣然后低壓保持一陣
    解決辦法:拆開出口閥取相關零件用10%異丙醇超聲清洗(出口閥零件都較小,拆時要小心)。
    Q4:入口單向閥故障

    判斷指標:鋸齒狀的有規律波動,波動范圍大于2%

    解決辦法:更換或清洗入口閥閥芯,清洗按下步驟拆開入口閥取出閥芯用10%異丙醇超聲清洗出口閥芯,超聲時用鑷子拿住超聲,超聲時間不宜過長(一般3分鐘左右即可)避免閥芯內部結構超聲損壞。

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